X

Для доступа к архивному номеру журнала введите, пожалуйста, Ваш электронный адрес

Введите вашу почту

X

Подписка на электронную версию журнала "Современная фармация"


Введите ваше имя


Введите вашу фамилию


Введите вашу специальность


Введите вашу специализацию















Введите вашу почту


Введите ваш телефон

Телефон должен содержать код страны

пример: +380 99 999 9999


Введите Область/город/посёлок где вы проживаете


Введите ваше место работы


Иммуноферментный анализ как способ найти то, что скрыто от посторонних глаз.

В настоящее время современная медицина не представляется возможной без высокочувствительных лабораторных анализов. И если ранее доктору нужно было определенное время для подтверждения своих догадок относительно вопроса присутствия того или иного возбудителя, паразитирующего в организме пациента, то сейчас достаточно всего нескольких часов и одного точного анализа, чтобы выявить истинную причину ухудшения состояния здоровья. Именно таким методом лабораторной диагностики является иммуноферментный анализ.


Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, основанный на проведении реакции «антиген-антитело», которая позволяет определить наличие определенных веществ белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).


Первоначально, чтобы понимать насколько хорош в профессиональном плане данный метод исследования, и почему он так важен, следует разобраться в том что же представляет собой реакция «антиген – антитело».

АНТИГЕН — это чужеродная для организма молекула белкового происхождения, которая попадает в тело человека вместе с инфекционным агентом или продуктами его жизнедеятельности. Однако, например, форменные элементы  крови другого человека (если она не совпадает с нашей кровью по группе) также являются антигенами. В организме антигены вызывают иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Для этого наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ - замок» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы проще распознаются организмом и уничтожаются клетками иммунитета.

 Существуют определенные этапы выработки и разновидности антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на попадание антигена в организм человека синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Соответственно, содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следующим классом иммуноглобулинов, которые синтезирует иммунная система являются антитела класса G (IgG), которые помогают полностья устраненить инфекцию, а также продолжают циркулировать в общем кровотоке, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. Именно на данном этапе синтеза иммуноглобулинов и основан метод вакцинации: благодаря которому, а конкретно препаратам содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой в виде микроорганизмов  быстро подавляют инфекцию еще до того, как она нанесет вред нашему здоровью.

Также в организме синтезируются иммуноглобулины класса А. Они в большом количестве содержатся на поверхности слизистых оболочек, обеспечивая так называемый щит на подступах к организму человека. Еще одним классом являются иммуноглобулины класса Е, которые обеспечивают защиту от паразитарных инфекций. 

В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также определить, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом.

И как определить, какие именно антигены и антитела в данный момент присутствуют в организме человека? Когда врач заподозрил,  что в организме пациента циркулирует определенный инфекционный возбудитель, или же существуют показания для измерения уровня определенного гормона, то именно в таких случаях пациенту назначают иммуноферментный анализ. Для начала у пациента берут образец биологической жидкости.

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови. В лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, мешающие проведению анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д. Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых на момент исследования уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является выявление и поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если реакция состоялась, красящее вещество вступает в ферментную реакцию с образовавшимся комплексом, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводы о результатах анализа

Иммуноферментный анализ в свою очередь подразделяется на качественный и количественный. В случае качественного анализа подразумевается более общий ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих произведенных тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.

Стоит обозначить, что предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались антитела и антигены меченые радиоактивными изотопами. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников исследовательских лаборатории, ученые занялись поиском более безопасного, и не менее действенного альтернативного диагностического метода.  В середине 60-х годов для идентификации и локализации антигенов в гистохимических препаратах и выявления полос преципитации в иммунодиффузионных и иммуноэлектрофоретических методах в качестве высокочувствительной метки было предложено использовать молекулы ферментов. Являясь мощными химическими катализаторами, ферменты способны эффективно вырабатывать легко определяемые вещества, что делает возможным определение ферментной метки в весьма малых концентрациях. На протяжении последних двух десятилетий иммуноферментные методы анализа интенсивно развивались как в теоретическом, так и практическом плане и к настоящему времени они сформировались в самостоятельное научное направление, имеющее важное прикладное значение. Использование твердых носителей для выделения антител с последующим специфическим связыванием анализируемого соединения и выявлением образовавшихся иммунных комплексов с помощью меченных ферментами компонентов положило начало методам твердофазного иммуноферментного анализа. Впервые такой анализ произвели в 1971 году Е. Энгвал и П. Перлман для детекции IgG фракции иммуноглобулинов, К. Ван Веемен и А. Шурс для обнаружения эстрогенов. Так, по определению 1971 год является годом открытия иммуноферментного анализа.

Явными преимуществами иммуноферментного анализа является высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность подразумевает под собой возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце минимальна. Специфичность же является критерием безошибочности диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, и ни какие другие. ИФА во многом заменил «золотой метод» лабораторной диагностики — бактериологический метод исследования, при применении кторого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение определенного времени (как правило, нескольких дней) выращивать культуру на питательной среде. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены  проводить лечение пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма исключительно по симптомам болезни. Определение иммуноглобулина М (IgM) с помощью ИФА сейчас позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни. Высокая степень точности и технологичности иммуноферментного анализа минимизирует вмешательство человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в условиях специализированных производства, что гарантирует точный результат.

Но, к сожалению, как и любое лабораторное исследование, иммуноферментный анализ обладает определенным спектром недостатков. Для проведения ИФА нужно точно знать, для чего именно проводиться исследование и что именно мы ищем. Исследование подразумевает, что доктор заранее должен предполагать определенную природу заболевания. В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может определить возбудителя и найти его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека. Стоит также заметить, что иммуноферментный анализ не является дешевым, поэтому при назначении данного исследования нужно руководствоваться его целесообразностью в тех или иных случаях.

Определение содержание в крови такого класса иммуноглобулинов как G и M (IgG, IgM) позволяет диагностировать следующий перечень заболеваний: вирусные гепатиты А, B, C, E, цитомегаловирусная инфекция, вирус Эпштейна – Барра, токсоплазмоз, корь, краснуха, сальмонеллез, дизентерия, клещевой энцефалит  и многие другие. Также ИФА помогает получить общую оценку показателей иммунитета человека и маркеров некоторых аутоиммунных заболеваний и онкологических заболеваний (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других), а также определить содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других). Обычно результатов иммуноферментного анализа не приходится ждать длительное время. Расшифровка происходит за достаточно короткое время, в среднем для предоставления результатов лечащему врачу необходимо не более 24 часов. В случае экстренной госпитализации, либо же в ситуации явной угрозы жизни пациенту, данный метод исследования возможно провести за несколько часов.

Расшифровкой ИФА, как правило, занимаются лечащие врачи. Результатом качественно проведенного исследования является только один исход: искомый комплекс либо обнаружен в организме пациента, либо нет. Если же  идет о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких). Как правило, анализируемые показатели могут иметь следующие результаты: 

1. IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию. 

2. IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции. 

3. IgM и IgA (одновременно совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.

4. IgG говорит либо о переходе заболевания в хроническое течение, либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.

Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).


В заключение хотелось бы сказать, что в современном мире трудно переоценить важность иммуноферментного анализа. С его помощью любой, даже не самый опытный врач, способен достоверно выявить заподозренный инфекционный процесс, и назначить адекватную и прицельную терапию для эффективного лечения заболевания. Но в тоже время следует понимать, что такие дорогостоящие исследования нужно назначать с умом и определенной целесообразностью, дабы оправдать потраченные на него средства.

 

Кислов Александр, сотрудник кафедры биохимии ХНМУ

Выберите вашу профессию